凯氏定氮仪分析不同季节蛋白质含量差异
金针菇是一种营养丰富的食用菌,栽培十分普遍.研究表明,金针菇含有多
种活性蛋白质成分,其中曾报道有凝集素活性的蛋白质FVA[1],免疫调节
蛋白质FIP-fve[2]和核糖体失活蛋白velutin,且这些蛋白质所具有的大
小和功能是不一样的.我们在用金针菇作材料进行抗病毒物质的筛选，蛋
白质的测定可以使用凯氏定氮仪进行快速的测定分析。
而使用定氮仪对于各季节蛋白质含量的测定分析，发现以冬季和夏季人工
栽培的金针菇鲜样(夏季为人工气候调节)进行相同的硫酸铵沉淀步骤以
后,过阴离子交换柱DEAE-SepharoseFF,分别都可以得到一个主要的蛋
白质峰Z1和Z2.从峰形可以看出,它们有所不同,且均为不对称峰.Z1似为
两个峰的合并(图1A),但右边的显然低于左边的;Z2也应为两个峰的合并
(图1A),但与Z1不同,它是右边的高于左边的.使用相同量的金针菇提取粗
蛋白质过DEAE-SepharoseFF后,比较发现Z1峰和Z2峰的最大A280nm值是
不一样的,Z2明显超过Z1.收集Z1和Z2这两个峰,脱盐并浓缩成2mL左右,
经SDS-PAGE后,各蛋白质条带的相对含量也与上述结果相应:取10L的
Z1浓缩液经SDS-PAGE后,可见明显的Mr=30103蛋白质带,22103蛋白
质带很弱(图1B);Z2浓缩液稀释5倍后,仍可见有30103蛋白质带(如果
不考虑被稀释的话,其含量应和Z1的接近),但22103蛋白质带非常清晰
(图1C),表明Z1和Z2所存在的差异主要来自22103蛋白质表达量的差
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